定量蛋白质组学

Quantitative proteomics

编 者：Tweedie-Cullen

出 版 社：VDM Verlag Dr.Muller Aktiengesellschaft & Co. KG

索 书 号：Q51/T971/2010/Y

藏书地点：武大外教中心

哺乳动物细胞向细胞外空间分泌大量的蛋白质，而由于环境因子的不同，所分泌的蛋白质的组成以及量有很大的差异。然而，这么大量的分泌性的蛋白都还有待于鉴定。最近蛋白组学技术方面的一些进展使得对这些分泌性蛋白的分离和鉴定变为现实。由于过度的以及持续性的氨基酸受体的激活导致神经细胞的死亡和损伤被认为是兴奋性中毒，而且其牵涉到一系列疾病的发生，比如老年痴呆症。已有的证据表明，在毒性压力条件下，神经细胞分泌的信号分子可以改变那些与他们毗邻的或者与其通过突触连接的神经细胞的功能。他们中的大部分信号分子通过容积传递的方式作用于其他的细胞并持续性的施加影响。

本书报道了对大鼠表皮细胞成功的进行了分离和体外培养。这些培养的细胞通过免疫组化的方法鉴定其中95%是纯的神经细胞。它们在B27添加物的培养条件下可以存活14天。通过荧光素二乙酸酯和碘化丙啶进行活性分析显示，即便在50uM浓度的红藻氨酸中，神经细胞仍然可以存活达72小时。利用2D-PAGE结合MALDI-TOF质谱的方法对这些条件化培养基进行鉴定显示有显著的牛血清白蛋白的的酶解。这种酶解只是在有表皮细胞存在的条件下发生的。除此之外，免疫细胞化学证实神经细胞和神经胶质都利用了培养基中的牛血清白蛋白。越来越多的证据表明心脑血管功能障碍尤其是血脑屏障的崩溃，是老年痴呆症发生的早期症状。在老年痴呆患者的大脑中常发现细胞内铜离子水平较高，这往往认为是金属离子介导的神经细胞死亡。作者的一种观点认为二价铜离子和白蛋白分子有很高的亲和力，以此可以进入中枢神经系统从而导致血脑屏障的功能异常。神经细胞吸收和加工白蛋白致使细胞内二价铜离子的释放，这可能是老年痴呆症患者中二价铜离子水平升高的机制所在。除此之外，对表皮神经细胞经过50uM红藻氨酸处理72小时的培养基初始分析发现其对牛血清白蛋白的加工处理发生了改变，其中的一些片段上升了而其它的则是下调了。本文对细胞生物学以及蛋白质组学方向的学生及学者都有一定的参考价值。

本书目录

摘要

第一章：前沿

第一节：中枢神经系统细胞间的交流

第二节：突出的线性传输

第三节：非突触的容积传递

第四节：谷氨酸和谷氨酸受体

第五节：兴奋过度和兴奋性中毒

第六节：兴奋性中毒和疾病

第七节：蛋白质组学

第八节：目标

第二章：材料和方法

第一节：实验概况和实验设计

第二节：细胞分离和细胞培养

第三节：培养物的鉴定

第四节：细胞活性实验和红藻氨酸刺激

第五节：培养细胞的收集以及用于电泳的细胞质提取

第六节：洗涤以及浓缩培养的细胞

第七节：反向双缩脲法蛋白质定量

第八节：二维双向电泳

第九节：2D胶的染色

第十节：肽指纹图谱进行蛋白质鉴定

第三章：结果和讨论

第一节：神经细胞的分离培养

第二节：细胞的鉴定

第三节：细胞活性分析

第四节：未刺激神经细胞的双向电泳分析

第五节：蛋白质的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定

第六节：添加B27的二维胶和条件化培养细胞的比较

第七节：牛血清白蛋白的酶解肽段覆盖率

第八节：文献报道的牛血清白蛋白的胶点模式

第九节：牛血清白蛋白被神经细胞和神经胶质所内化

第十节：大脑中的白蛋白

第十一节：老年痴呆病白蛋白可能作为铜离子的载体

第十二节：红藻氨酸刺激的皮质神经细胞的双向电泳分析

第十三节：一般问题

第十四节：结论

附录

参考文献

（闫俊杰）